De la lame au résultat : circuit complet d’un test HER2 ou PD-L1
Le Centre Jean Perrin à Clermont-Ferrand ouvre les portes de son laboratoire d’anatomo-pathologie pour une immersion pédagogique au cœur de la pratique, aux côtés de deux experts reconnus : la Dr Marie-Ange Mouret-Reynier, cancérologue, et le Pr Frédérique Penault-Llorca, anatomopathologiste.
Cette visite guidée permet de découvrir les étapes techniques, les outils utilisés et les garanties de qualité mises en place pour fiabiliser les résultats d’immunohistochimie (IHC) et d’hybridation in situ (ISH). Elle met également en lumière le rôle central des pathologistes dans la standardisation, la précision diagnostique et l’interprétation collégiale des biomarqueurs HER2 et PD-L1.
Quels anticorps et équipements sont utilisés ?
HER2 : l’anticorps PATHWAY 4B5
Pour l’évaluation de l’expression HER2 en immunohistochimie, le laboratoire utilise l’anticorps PATHWAY 4B5, validé pour la détection spécifique de la protéine HER2 dans les cancers du sein. Il est adapté aux équipements disponibles dans le service pour garantir une lecture homogène.
PD-L1 : adaptation selon les clones et les plateformes
Deux types de clones sont utilisés selon les cas : ceux commercialisés par Ventana ou par Dako, y compris pour les tests dits « companion diagnostics ». Le laboratoire utilise en routine le clone SP263, reconnu pour sa fiabilité dans le calcul du score CPS (Combined Positive Score) dans le cancer du sein.
De la réception du prélèvement à la lame colorée
Étapes de préparation standardisées
- Réception et enregistrement du prélèvement (identitovigilance rigoureuse avec code-barres),
- Fixation des tissus,
- Déshydratation et inclusion en paraffine,
- Coupe du bloc et montage sur lames,
- Chauffage contrôlé puis passage en automates d’immunomarquage.
Chaque lame est accompagnée d’un témoin interne permettant de valider le bon déroulement de la coloration.
Sécurisation et traçabilité
Tous les équipements sont automatisés et la chaîne est entièrement tracée pour garantir la standardisation des marquages, le respect des dosages, et la sécurité des données patient.
Lecture, confrontation et validation des résultats
Lecture collective en cas de doute
En cas d’interprétation incertaine (ex. : score PD-L1 proche du seuil de 10), les pathologistes peuvent confronter leurs lectures en temps réel. Le fonctionnement du laboratoire, avec des postes côte à côte, favorise les échanges instantanés et les relectures collégiales.
Tests d’assurance qualité
Le laboratoire participe régulièrement à des programmes d’assurance qualité externe. Ces tests impliquent la réception de lames à colorer et à interpréter, envoyées ensuite pour évaluation. Cela permet de valider à la fois :
- la qualité technique de la coloration,
- la pertinence de l’interprétation.
Cas particuliers : réalisation d’une hybridation in situ (ISH)
Dans quels cas l’ISH est-elle réalisée ?
L’hybridation in situ est effectuée lorsque le score HER2 est 2+ en immunohistochimie, c’est-à-dire équivoque. Elle permet de vérifier si une amplification du gène HER2 est présente ou non dans les cellules tumorales.
Étapes techniques de l’ISH
- Préparation de lames avec une coupe très fine de tissu,
- Application de sondes spécifiques HER2 sur les noyaux,
- Fixation et hybridation des sondes,
- Visualisation des signaux de fluorescence.
Le nombre de copies du gène HER2 est ensuite évalué :
- ≤ 2 signaux = pas d’amplification,
- > 6 signaux ou amas de signaux = amplification confirmée.
Apport du scanner à fluorescence
Lorsque les signaux sont trop nombreux ou regroupés, la lecture automatisée via scanner à fluorescence permet un comptage précis. Le logiciel calcule la densité et la surface des signaux, complétant efficacement la lecture manuelle.
Expertise centralisée et volumes importants
Le centre Jean Perrin dispose d’une forte expérience dans les tests HER2 et PD-L1, notamment via son rôle de laboratoire de référence recevant de nombreux cas extérieurs. Ce haut volume d’analyses permet de :
- maintenir une expertise technique pointue,
- garantir un haut niveau de reproductibilité,
- intégrer les évolutions récentes des guidelines.
En résumé : les points clés de la réalisation des tests
| Étape | Objectif |
|---|---|
| Fixation & inclusion | Préserver l’intégrité des antigènes |
| Coupe & coloration | Réaliser une IHC standardisée (HER2, PD-L1) |
| Lecture collégiale | Réduire les écarts d’interprétation |
| Assurance qualité | Maintenir la fiabilité technique et diagnostique |
| Hybridation in situ | Confirmer ou exclure une amplification HER2 |